在人类抗击肿瘤的过程中， 治疗通过对患者进行分类分型，针对患者自身特征选择 治疗方案。这类治疗突破传统治疗的局限性，可以给患者带来更长久的生存获益。 指导各类治疗选择的依据通常是患者的基因分型，其依据的生物标志物如TMB、dMMR和各类靶点指导的治疗近年来已成为各瘤种的标准治疗方案。

近日，医院沈琳教授、彭智教授团队与思路迪诊断共同合作成果发表于国际知名期刊TheJournalforImmunoTherapyofCancer（影响因子13.），探索了胃癌的 治疗-基于NGS检测的爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)可以指导胃癌免疫治疗的选择。

背景介绍

EBV相关胃癌(EBVaGC)是胃癌的一种独特分子亚型，预后良好，EBV感染对胃癌中免疫检查点阻断(ICB)功效的影响偶有报道但确切疗效和潜在机制仍有待阐明。EBV编码RNA(EBER)原位杂交是检测EBV的传统方法，但单纯的组织切片杂交或染色无法同时检测NCCN指南推荐的可指导胃癌治疗的其他分子生物标志物，如TMB，MSI等。在此，我们建立了准确可靠的NGS检测EBV的方法，并探索ICB在通过NGS鉴定的EBVaGC中的功效及疗效相关的潜在生物标志物。

研究内容

1

使用两个独立的胃癌队列（训练队列和验证队列）建立并验证了NGS检测EBV的算法。

通过排除EBV基因组中人类同源基因及高GC含量区域、联系EBV的致病致瘤机制及实际捕获效率，我们建立了以EBV四基因（BZLF1、EBNA-1、EBNA-2、EBNA-3）为基础的检测EBV的算法。以肿瘤样本EBER-ISH结果为标准，我们利用例胃癌患者训练队列，获得了NGS检测EBV感染的阈值。在76例胃癌患者的验证队列中，我们验证了基于NGS的EBV算法的高性能，灵敏度达到95.7%（22/23），特异性为%（53/53），ROC曲线下面积达到0.。对于四种EBV阳性细胞系，在不同测序深度下，肿瘤细胞稀释度不低于5%时，每个样品中的EBV均可被稳定检出。

2

在接受免疫治疗的晚期或转移性胃癌患者中评估了EBV感染预测ICB疗效的价值。

基于已发表证据，EBVaGC患者对ICB的敏感性仍存在争议。因此我们回顾性纳入了95例接受ICB治疗的晚期或转移性胃癌患者，以此评估EBV感染对ICB疗效的预测价值。95名患者的EBV状态由NGS方法确定。在pMMR患者中，EBV+/pMMR患者的应答者比例显着高于EBV-/pMMR患者（p=0.）。生存分析表明，EBV+/pMMR患者的PFS（中位PFS8.5vs2.0个月，p0.）和OS（中位OS未达到vs5.0个月，p=0.）显著优于EBV-/pMMR患者。COX多元回归分析显示EBV状态是ICB后pMMR胃癌患者PFS的强预后因素（HR:0.39，95%CI:0.16-0.97，p=0.）。

此外，在22名EBV+/pMMR患者（即EBVaGC）中，ORR为54.5%（95%CI:33.7%-75.4%）与EBV-/dMMR组相当（p=0.）.生存分析表明，EBV+/pMMR和EBV-/dMMR患者具有相当且更有利的PFS和OS，两者都比EBV-/pMMR患者从ICB中生存获益更多。多变量Cox回归分析也证实，无论单药治疗还是联合治疗，EBV和dMMR在预测PFS方面具有同等效力。

3

探索ICB疗效的分子预测生物标志物，以提高EBVaGC患者ICB疗效的预测准确性。

我们对95例接受过ICB治疗中的22例EBVaGC患者肿瘤组织进行多重荧光免疫组化染色，探索肿瘤微环境中淋巴细胞和潜在ICB生物标志物表达与患者接受免疫治疗获益的关系。分析显示，ICB不应答组肿瘤中CTLA-4+和TIM-3+细胞的密度显着高于ICB应答组。在接受抗CTLA-4和抗PD-1/L1联合治疗的14名患者中，10名达到PR且接受双免联合治疗的患者比接受单纯抗PD-1/L1治疗的患者有更好的应答（p=0.）。鉴于TMB是胃癌免疫治疗中重要的biomarker，我们通过对22名EBVaGC患者NGS分析得到了他们的TMB水平，在20例样本合格的EBVaGC中，响应组肿瘤样本的TMB值更高，且TMB更高组的PFS显著更长。对22例EBVaGC患者肿瘤组织进行了突变检测发现SMARCA4基因突变在应答组中更常见（40%vs0%，p=0.）。所有具有SMARCA4突变的患者在ICB后均达到PR，并且PFS高于野生型SMARCA4患者。

研究结论

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我们创新地开发了一种基于NGS的EBV检测策略，该策略可以同时检测胃癌患者的其他基因组特征。

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我们的EBV算法在验证队列中对EBER-ISH的敏感性为95.7%，特异性为%，总体准确率为98.7%。

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该方法识别的EBV感染胃癌患者在接受ICB治疗后，疗效与dMMR相当。

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TME分析显示，具有高CTLA-4水平的EBVaGC患者对单药抗PD-1/L1治疗的响应较差，并且EBVaGC从PD-1/L1联合CTLA-4阻断中获得的益处大于抗PD-1/L1单药治疗。

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进一步的研究发现，TMB和SMARCA4突变可能是EBVaGC患者ICB疗效的预测生物标志物。

研究意义

肿瘤的治疗已进入 医学时代， 诊断和 治疗缺一不可。本研究首次建立了非WGS检测的NGS检测EBV方法，且完成了技术和临床的双重验证。此方法的建立极大地降低了基于NGS检测EBV的门槛，为EBV在肿瘤临床中的检测普及提供了极大的便利度；此外4个EBV基因结合相关panel后，肿瘤患者可以一次检测测全指导免疫与靶向治疗选择的生物标记物，更具成本效益和临床实践应用的可行性。通过迄今 样本量的EBV阳性胃癌队列的挖掘，研究发现对PD-1/L1和CTLA-4的联合阻断治疗在EBVaGC患者的获益大于抗PD-1/L1单药治疗，提示EBVaGC患者接受双免治疗临床获益可能更大，为EBV阳性胃癌患者在未来的治疗选择上提供了指导数据。

参考文献

YuezongBai,ZhiPeng,LinShen,etal.EfficacyandpredictivebiomarkersofimmunotherapyinEpstein-Barrvirus-associatedgastriccancer.JImmunotherCancer.Mar;10(3):e.doi:10./jitc--.